Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型肾病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现胰脏自身突变到经常出现1型式白血病外科疼痛的十分困难叛将在婴幼儿时期就有很好的描述，多个胰脏自身突变非典型的婴幼儿中会有70%在血清转换后10年内患上白血病，而随访15年的婴幼儿这一比例增高到84%。相比较之下，占外科1型式白血病一半以上的型式1型式白血病的确诊程序还并未获得充分的分析。

越发多的人开始使用分期系统来假定1型式白血病的十分困难：个质在经常出现多种胰脏自身突变时重回第1先决条件，经常出现血糖异常时重回第2先决条件，经常出现疼痛时重回第3先决条件。一些多发胰脏自身突变非典型的个质，在1期和2期，十分困难较慢，并发展为确诊的1型式白血病。我们之前描述了都由成员在首次检查到多种胰脏自身突变比对后最少10年无白血病的近乎快十分困难者，这组成员病征人口数少，但相似性非常明确。随后，我们发现胰脏自身抗原甲基化CD8+T线或粒质反应在十分困难平稳的病征中会也就是说不实际上，但在近期确诊和长期实际上的白血病病征中会很容易检查到。这有可能暗示，与十分困难病征相比较，这些病征免疫性反应的可调增强。

早期分析暗示，尽管可调性T线或粒质(Treg)数量正常，但白血病病征实际上一些功能缺陷，其中会包括对IL-2的反应潜能降低。此外，白血病病征中会的波动CD4+T线或粒质有可能对可调更具抵抗性，表现为波动T线或粒质的消除减慢，自然地激发的Treg和质外激发的抑止Treg，以及抗原历程的CD4+T线或粒质中会IL-2反应减慢。本分析的旨在是描述了CD4+可调性T线或粒质(Treg)在一小群近乎平稳十分困难者中会的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

分析方法：BOX分析是一项以人群为基础的纵向分析，在21岁一般而言确诊的病征亲属中会检查1型式白血病的危险因素。我们之前描述了长期平稳十分困难者的相似性，他们依然多重胰脏自身突变非典型超过10年，但并未经常出现白血病的外科疼痛，慢性或非来进行性免疫性。随后，10名继续依然无白血病并愿意透过大量血液比对的平稳十分困难者纳入T和B线或粒质功能分析。在目前的分析中会，8名慢十分困难者(SP组成员)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的胰脏自身突变非典型。所有的举例来说都处于1型式白血病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身突变对某些抗原的非典型反应，然而，一名病征并未处于2期最少6年，但并未经常出现外科疼痛，一名病征被病人为白血病，该人会72岁，在采集实验比对时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在研究小组中会对该NADP来进行了单独评核反应。分离外周血单个核反应线或粒质(PBMCs)，采用多参数流式线或粒质法术和T线或粒质消除试验评核反应NADP中会Treg的频叛将、表型式和功能。使用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)来进行无监督聚类分析，评核反应Treg表型式。

结果：与身质健康NADP相比较，来自慢十分困难质的潜意识CD4+T线或粒质的监督聚类辨识，激能活的潜意识CD4+ Treg频叛将增高，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)暗示增高有关。一名HbA1c增大的病征与十分困难平稳者和也就是说的结果表明成员相比较，Treg谱有所不尽相同。功能分析暗示，与身质健康NADP相比较，来自平稳十分困难质的Treg抑制的CD4+波动T线或粒质消除相对来说损毁。表现为对波动CD4+T线或粒质CD25和CD134暗示的消除增高。

三幅1 险恶的表型式分析辨识，CD4+Treg病毒性式在慢十分困难描述符中会增高。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有NADP的能活CD4+CD45RA -线或粒质上。根据标明物暗示解剖出10个元簇:潜意识T线或粒质_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T线或粒质;HLA-DR + GITR +潜意识T线或粒质;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)使用9个不尽相同Treg标明填充的10个元簇的MST。每个节点代表一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在节点组成员周围上色。每个节点中会的饼三幅指出单个标明的暗示级别。(b)每个元聚类的热三幅，以辨识整质标明暗示。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)填充三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于核反应素为每个metacluster罐线或三幅(核反应素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T线或粒质(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T线或粒质(l)。绿色带子代表人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对指出法秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 使用CITRUS的估测式证实，Treg频叛将的增高是十分困难平稳的标志。分级依赖型式(a - f)和甜菜分析(g-k)比较SP举例来说和也就是说的HD举例来说在CD4+CD45RA−T线或粒质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的传奇色彩三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR暗示来进行分离，模拟FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(杂色)组成员以及NADPSP 606(绿色)中会CD25+ cd127的频叛将汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型式子集的罐线或三幅;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度后处理，对角突出的簇被识别为SP和HD描述符错综复杂的不尽相同。(j)罐线或三幅辨识了在SP(杂色)和HD(灰点)组成员中会，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对于核反应素(比例)。(k)直方三幅辨识每个簇的表型式(粉红色)和Treg标明相对于暗示与时代背景暗示(紫色);上列，磁盘Treg_3;下面恰巧，磁盘Treg_4。时代背景与所有其他簇中会标明的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对指出法秩检验

三幅3 与身质健康献血者相比较，十分困难平稳者潜意识treg的GITR增高。每个潜意识CD4+T线或粒质元簇(潜意识T线或粒质_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T线或粒质;HLA-DR + GITR +潜意识T线或粒质;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个暗示标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的暗示热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR暗示串联，辨识直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对指出法秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NADP包括，p< 0.05(紫色)NADPSP 606和也就是说的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR暗示，从分级依赖型式，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(绿色)串联，辨识直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对指出法秩检验

三幅4 来自平稳十分困难的CD4+ treg线或粒质控制波动CD4+T线或粒质的潜能降低。SP组成员用紫色的线或和带子指出，HD组成员用灰色的线或和带子指出，绿色的线或/带子指出NADPsp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒质来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸线或粒质，培训3天后来进行流式线或粒质法术检查。(a-d)与CD4+；也者相对于应的treg培训(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除%-。使用非典型对照(激能活的响应线或粒质仅有treg)计算消除%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 波动CD4+T线或粒质对平稳十分困难的T线或粒质酪氨酸的消除更敏感。SP组成员用紫色的线或和带子指出，HD组成员用灰色的线或和带子指出，绿色的线或/带子指出NADPsp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒质来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸线或粒质，培训3天后来进行流式线或粒质法术(CD25反染)和线或粒质因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百分叛将(b)。(c,d) CD25消除百分叛将(c)和CD134消除百分叛将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中会的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出结论的结论是，来自平稳十分困难子的酪氨酸潜意识CD4+Treg在GITR暗示中会获得了引入和丰富多彩，强调了再进一步分析Treg在1型式白血病风险个质中会的举例来说的合理性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28